Питательные среды делятся на обычные, специальные и цветные.
Обычные среды. Мясо-пептонный бульон — МПБ; мясо-пептонный агар — МПА; мясо-пептонная желатина — МПЖ; молоко и картофель.
МПБ:
1) на 500 г изрубленного, очищенного от костей, сухожилий, жира и пленок говяжьего мяса берут 1000 г воды (1:2);
2) кипятят 40—60 мин. или ставят в холодное место на 24 часа н затем кипятят 15 мин.;
3) выжимают мясо через марлю (или редкую тряпку);
4) добавляют водой до первоначального объема;
5) прибавляют 1% пептона и 0.5% поваренной соли и кипятят 15 мин.;
6) устанавливают реакцию рН 7,6—7,8 и фильтруют через бумажный фильтр; если нужно, добавляют глюкозы 2—3%, глицерина 3—5% и разливают по пробиркам;
7) стерилизуют при 120° — 15 мин.
МПА:
1) в готовый бульон нарезают 3% агара;
2) расплавляют текучим паром в автоклаве или в аппарате Коха;
3) устанавливают реакцию рН 7,6;
4) для осветления добавляют яичный белок или 0,6% альбумина, разведенного в воде; кипятят до полного свертывания белка;
5) фильтруют в аппарате Коха;
6) если нужно, добавляют глицерина 5%, сахара виноградного 2%;
7) стерилизуют 15 мин. при 120°.
МПЖ:
1) в готовый бульон нарезают 10% (зимой) и 15% (летом) желатины;
2) расплавляют нагреванием в автоклаве до 100 — 105°;
3) устанавливают реакцию рН 7,6; 4) очищают яичным белком;
5) фильтруют через смоченный бумажный фильтр;
6) разливают по пробиркам обычным порядком;
7) стерилизуют 20 мин. при 112° или 3 дня по Уа часа при 100°.
Молоко:
1) снятое молоко разбавляют на 2/3 водой;
2) фильтруют и разливают по пробиркам;
3) стерилизуют в аппарате Коха текучим паром 3 дня по 30 мин.
Картофель:
1) чистят, удаляют глазки;
2) режут цилиндрами, квадратами или ломтиками;
3) держат 20—30 мин. в 1-проц. растворе соды;
4) стерилизуют 15 мин. при 112° или лучше текучим паром 3 дня по 1/2 часа.
Определяют концентрацию водородных ионов в средах колориметрическим методом при помощи аппарата Михаэлиса, содержащего ряды стандартных индикаторов (мета- и паранитрофеноловые рН8,4—5,4; гамма- и альфа-динитрофеноловые рН 5,4—2,8) и аппарата Вальполя, который имеет 6 гнезд в два ряда пробирок.
Матовое стекло аппарата Вальполя должно находиться с противоположной стороны к наблюдателю. В передний ряд гнезд, а также в среднее заднее гнездо ставят пробирки одинакового диаметра со стандартными пробирками аппарата Михаэлиса. В пробирки переднего ряда наливают по 2 мл испытуемой среды. Затем в них добавляют дестиллированную воду: в крайние пробирки переднего ряда по 5 мл, а в среднюю — 4 мл. В среднюю пробирку заднего ряда наливают только одну дестиллированную воду в количестве 7 мл.
Среды для бактериологических целей чаще всего готовят слабо щелочной реакции, например рН 7,4—7,6. Следовательно, пользуются метанитрофеноловым рядом. Из аппарата Михаэлиса берут соответствующие стандарты. Например, нам требуется установить рН 7,4—7,6. Для этого берут из аппарата Михаэлиса стандарты с показателями рН 7,6 и 7,4. Их ставят в крайние гнезда заднего ряда. В среднюю пробирку переднего ряда добавляют 1 мл мета-нитрофенолового индикатора, прилагаемого к аппарату Михаэлиса. Так как реакция приготовляемого мясопептонного бульона кислая, то цвет среднего ряда пробирок при просмотре на свет через отверстия не будет соответствовать боковым. В среднюю пробирку переднего ряда добавляют однограмадовой градуированной пипеткой 0,4-проц. или 1 N раствора NaOH (что одно и то же) до тех пор, пока цвет среднего ряда не будет соответствовать одному из крайних рядов. Затем учитывают, сколько пошло на 2 мл раствора NaOH, например 0,3 мл. Исходя из того, что на 2 мл бульона потребовалось 0,3 мл 10 N щелочи, легко определить, сколько потребуется, например на 1000 мл:
(0,3 1000) : 2 = 150.
Следовательно, на 1 л потребуется 150 мл 1 N NaOH, или 15 мл 10 N NaOH. Чтобы не увеличивать объем среды, добавляют к ней 15 мл 10 N NaOH.