Специальная часть методических указаний по проведению обязательного минимума исследований в ветеринарно-бактериологических лабораториях при диагностике заразных болезней сельскохозяйственных животных

Сибирская язва

Материал на сибирскую язву исследуется путем:
а) просмотра мазков под микроскопом;
б) посевов на питательные среды;
в) заражения мелких лабораторных животных и
г) реакции преципитации.

Мазки окрашиваются водными растворами основных красок по Граму и на капсулы по одному из существующих способов (по Романовскому-Гимза, Гиссу, Фоту, Иона, Ребигеру, Клетту, Ольта и др.). Бациллы сибирской язвы в мазках из крови органов и жидкостей из организма имеют капсулы и располагаются то одиночно, то по две, то в виде нитей. Концы, обращенные друг к другу, у бацилл резко обрубленные, а свободные — большей частью закругленные. Морфология бацилл не всегда бывает типичной. Нередко в мазках бациллы окрашиваются не равномерно, а в виде зернистых осколков и теневидных изъеденных форм; встречаются и формы коккоподобные (чаще всего при хронической форме у свиней и в мазках из пораженных лимфатических узлов).

Посевы производятся на мясо-пептонный бульон (МПБ) и мясопептонный агар (МПА) (pH 7,1—7,4) и выдерживаются в термостате не менее 1—3 суток. Если материал не свежий или имеется подозрение на загрязнение посторонней микрофлорой, то, кроме посевов в пробирку с МПА и МПБ, производится дробный засев на чашки Петри с МПА. Полученная культура исследуется макро- и микроскопически как в мазках, так и в висячей капле. Типичная форма сибиреязвенного микроба: в МПБ образует хлопьевидный осадок при прозрачности бульона, на МПА— бело-серые компактные колонии в виде головы медузы. Встречаются и атипичные формы:

1) в МПБ равномерное помутнение бульона, мазки из которого дают не длинные нити, а одиночные или парные палочки; на МПА — бело-серые компактные колонии с гладкими краями, причем маз ки также дают одиночные или парные палочки, но не нити;
2) на МПА — слизистые с гладкими краями колонии, причем бактерийная масса при дотрагивании петлей тянется в виде нити. Атипичные формы (варианты сибиреязвенного микроба) при последующих пересевах на среды и пассажировании через животных обычно дают в дальнейшем типичную форму.

Заражение мелких лабораторных животных производится подкожно исходным материалом, а также при надобности — и полученной культурой. Белые мыши заражаются на спине задней части ее (по 0,1—0,2 мл), кролики и морские свинки — в области живота (0,2—0,5 мл). Наблюдение за опытными животными длится до 10 дней. Павшие животные вскрываются, делаются мазки и производятся посевы на среды из крови сердца, печени, селезенки, из места инъекции для соответствующего исследования.

Реакция преципитации производится в соответствии с инструкцией Министерства сельского хозяйства СССР. При исследованиях свежего материала (паренхиматозные органы, а при отсутствии их — лимфатические узлы или костный мозг) он выдерживается в термостате 18—20 часов. Берется кусочек в 1—2 г, кипятится в пробирке с 5—10 мл физраствора поваренной соли в течение 30—40 минут, После чего экстракт фильтруется до полной прозрачности и исследуется согласно инструкции. Если ма териал не свежий, реакция Термопреципитации производится без выдерживания материала в термостате.

Предварительное заключение должно быть дано уже при наличии в мазках типичных для сибирской язвы бацилл, окруженных капсулой, в тот же день. Окончательное заключение дается по культурам бацилл сибирской язвы (срок 1—3 дня), гибели от сибирской язвы лабораторных животных, зараженных материалом (культурой), или при наличии положительной реакции преципитации.

Один просмотр мазков не может служить основанием для дачи окончательного ответа даже при наличии палочек, сходных с сибиреязвенной бациллой. Отсутствие в мазках, бацилл, а также наличие посторонней микрофлоры, не типичной для сибиреязвенных бацилл, также не может служить основанием для дачи отрицательного ответа.

Окончательный ответ о результатах исследования дается в течение 7 дней после получения материала для исследования.

-1-  -2-  -3-  -4-  -5-  -6-  -7-  -8-  -9-  -10-  -11-  -12-  -13-  -14-  -15-  -16-  -17-  -18-  -19-  -20-  -21-  -22-  -23-  -24-  -25-  -26-  -27-  -28-  -29-  -30-  -31-  -32-  -33-  -34-  -35-