Постановка реакции агглютинации (реакция Райта) на бруцеллез

Постановка реакции агглютинации (реакция Райта) на бруцеллез

1. Для постановки реакции агглютинации на бруцеллез применяются свежие сыворотки, не имеющие гнилостного запаха, значительной коагуляции белка и гемолиза. Допускается исследование сывороток, консервированных фенолом до 0,5%, со сроком их давности не свыше 15 дней.

2. Реакция ставится на физиологическом растворе (0,85%) поваренной соли в 4 разведениях: для свиней, коз, овец и собак 1 : 25; 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200, для крупного рогатого скота лошадей и верблюдов 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200; 1 : 400 в количестве 1 мл каждого разведения в пробирках с ровным выпуклым дном.

При массовых исследованиях допускается постановка реакции в двух первых разведениях: для свиней, овец, коз и собак 1 : 25 и 1 : 50, для крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов 1 : 50 и 1 : 100.

Для предохранения от прорастания посторонней микрофлорой рекомендуется постановка реакции на фенолизированном 0,5% физрастворе.

3. Контроль реакции ставится:
а) с отрицательной — негативной сывороткой в тех же разведениях, как и испытуемые сыворотки;
б) с положительной — позитивной сывороткой до предельного титра;
в) антиген с 1 мл физраствора.

4. Во все пробирки, в том числе и контроль, при постановке прибавляется 0,05 мл 10-миллиардного антигена, приготовленного согласно особой инструкции. Затем все пробирки тщательно встряхиваются до получения равномерной взвеси.

Допускается разлив сывороток в соответствующих дозах и микропипеткой. В этом случае антиген приливается по 1 мл, предварительно разведенный до 500 миллионов микробных тел в 1 мл. Сыворотки разливаются в дозах 0,04, 0,02, 0,01 и 0,005, что соответствует разведениям 1 : 25; 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200.

5. При разливе сывороток обязательна тщательная промывка пипеток после каждой сыворотки не менее 6 раз в двух-трех посудах.

6. После тщательного встряхивания пробирки ставятся на 4—10 часов в термостат при температуре 37—38°С, затем пробирки выдерживаются при комнатной температуре 24—18 часов.

Учет реакции производится макроскопически.

7. Диагностически положительной испытуемая проба сыворотки считается при наличии макроскопической агглютинации в разведении 1:50 для свиней, овец, коз и собак и 1 : 100 для крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов с оценкой их не менее чем на два креста.

8. Диагностически сомнительной испытуемая проба сыворотки считается при наличии макроскопической агглютинации только в разведении 1 : 25 для свиней, овец, коз, собак и 1 : 50 для крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов с оценкой не менее чем на два креста.

9. Все сыворотки, давшие агглютинацию в каких-либо разведениях, исследуются повторно из той же пробы в 4 разведениях: для свиней, овец, коз и собак: 1 : 25; 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200; для крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов: 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200; 1 : 400. При получении сомнительной реакции кровь от животного берется повторно через 3—4 недели.

10. При получении положительных или сомнительных реакций в ответе хозяйству указывается разведение, в котором получена реакция.

11. Сыворотки крупного рогатого скота, поступающие из хозяйств, в которых имелись или имеются аборты на почве бруцеллеза или выделяется значительное количество положительно реагирующих по реакции агглютинации (свежая инфекция), исследуются в 4 разведениях: 1 : 25; 1 : 50; 1 : 100; 1 : 200. При наличии макроскопической агглютинации в разведении 1 : 25, 1 : 50 не менее чем на два креста проба считается диагностически сомнительной. Если через 3—4 недели при повторном исследовании сывороток сомнительно реагирующих животных титр агглютинации не будет превышать 1 : 25, то проба признается диагностически отрицательной.

12. Если при исследовании сывороток свиней и лошадей будут получены только сомнительные реакции (у свиней 1 : 25, у лошадей 1 : 50) и при повторной проверке этих животных титр агглютинации не повысится, то при условии отсутствия в хозяйстве клинических признаков бруцеллеза среди этих видов животных и реагировавших в более высоких разведениях пробы признаются диагностически отрицательными.

13. Оценка реакции агглютинации в крестах:
++++ полное просветление жидкости при наличии явно выраженного зонтика (при встряхивании зонтик разбивается на хлопья, комочки и крупинки);
+++ те же явления, что отмечены для 4 крестов, но жидкость слегка опалесцирует (недостаточно полное просветление);
++ просветление жидкости выражено слабо, имеется наличие зонтика, который при встряхивании разбивается на хлопья, комочки и крупинки;
+ отсутствие или весьма незначительное просветление при наличии слабо выраженного зонтика или его следов, при встряхивании в жидкости заметны комочки и крупинки;
- отрицательная реакция агглютинации.

Отсутствие просветления и зонтика. Микробы могут оседать на дно в виде точки, при встряхивании разбиваются в равномерную муть.

-1-  -2-  -3-  -4-  -5-  -6-  -7-  -8-  -9-  -10-  -11-  -12-  -13-  -14-  -15-  -16-  -17-  -18-  -19-  -20-  -21-  -22-  -23-  -24-  -25-  -26-  -27-  -28-  -29-  -30-  -31-  -32-  -33-  -34-  -35-