Лизис на плотной среде

Если бактерии в количестве 108 распределить на поверхности агаровой пластинки и поставить в термостат, то они, размножаясь, дают множество мелких колоний, которые вскоре сливаются с образованием однородной пленки, или «газона» бактериального роста. Размножение бактерий продолжается до тех пор, пока не истощится питательная среда или не накопятся токсичные продукты жизнедеятельности. Если на ранней стадии роста бактериальной пленки на агаровую пластинку нанести одну фаговую частицу, она адсорбируется на бактерии и начнет инфекционный цикл. Фаговое потомство из места лизиса, медленно диффундируя через агар, постепенно распространяется в радиальных направлениях. Во время этого процесса соседние бактерии подвергаются воздействию фага и лизируются, причем популяция фага продолжает возрастать. В конечном счете, зона лизиса может стать достаточно обширной, без труда различимой невооруженным глазом. Дэрелль, наблюдавший эти просветленные зоны, дал им название «taches vierges» (девственных пятен) или «plagues» (бляшек). По-немецки они были названы «Locher» (дырками), по-английски «plaques» (бляшками) или «clearings» (просветлениями).

Величина и морфология стерильного пятна характерна для каждой отдельной пары фаг — бактерия и может изменяться как при размножении разных фагов в одной и той же бактериальной клетке, так и при размножении одного и того же фага в разных бактериальных клетках. Величина и морфология пятна может также изменяться в результате мутации фага.

Стерильное пятно увеличивается во время инкубирования чашки с посевом, достигая максимума обычно через 8—12 час., хотя при более продолжительном инкубировании иногда наблюдается его дальнейшее медленное увеличение. Пятно не может увеличиваться бесконечно, так как его развитие зависит от активного размножения бактерии - хозяина. Если вследствие истощения питательных веществ темп размножения замедляется, то это сказывается и на лизисе, и выход фага заметно уменьшается.

Другим фактором, влияющим на размер стерильных пятен, является величина отдельной вирусной частицы. Элфорд и Эндрьюс (1932), измерявшие величину частиц у ряда штаммов бактериофага путем фильтрования через коллодиевые мембраны, установили обратно пропорциональную зависимость между величиной частицы и величиной стерильного пятна. Эти авторы отмечают, что частицы небольшого размера диффундируют быстрее крупных, вследствие чего в течение ограниченного периода времени, необходимого для развития пятна, популяция мелких частиц распространится дальше от общего центра,, чем популяция более крупных частиц. Несмотря на вескость такого обобщения, хорошо обоснованного физическими законами, его многократно критиковали, и потому его нельзя принять без некоторых оговорок (Феликс, 1953). Действительно, кроме диффузии, на величину стерильного пятна могут влиять и многие другие факторы, например выход фага после лизиса клетки, латентный период и скорость адсорбции. Приведенную выше зависимость между размером стерильного пятна и размером фаговой частицы можно объяснить еще и тем, что для мелких фаговых частиц характерен более кратковременный латентный период.

~1~ ~2~ ~3~ ~4~ ~5~ ~6~ ~7~ ~8~ ~9~ ~10~ ~11~ ~12~ ~13~ ~14~ ~15~