Методы исследования микробов. Бактериоскопический метод

Микроскоп. Имеет тяжелый штатив для лучшей устойчивости, подвижный столик, кремальеру, а также микрометрический винт, зеркало, конденсор с ирисовой диафрагмой, объективы со слабым, средним и сильным увеличением (с масляной иммерсией), а также окуляры. Врачу-эпизоотологу, которому приходится выезжать на места с микроскопом для ускорения постановки диагноза, полезно иметь дорожный микроскоп (он может быть успешно использовав и для работы в лаборатории).

Увеличение объективов и окуляров обозначено на них цифрой со знаком X (умножения). Общее увеличение микроскопа определяется произведением показателей увеличения объектива окуляра.

Масло для иммерсий. Употребляется кедровое с показателей преломления 1,515, равным показателю преломления стекла (пока- аатель преломления воздуха равен 1,0, а воды — 1,33). Для замены кедрового масла пользуются некоторыми другими химикалиями, которые берутся или в чистом виде, или в виде смесей с другими веществами. Сюда относятся: глицерин (1,47), касторовое масло (1,48), персиковое масло (1,49), укропное масло (1,50), гвоздичное масло (1,53).

Можно употреблять смеси касторового масла и нафталина, касторового и гвоздичного масел. Для установления определенного показателя преломления смесей смешивают одно вещество с другим стеклянной палочкой и на-блюдают за ней. Когда она потеряет свои очертания, значит смесь достигла показателя преломления, равного показателю преломления стекла.

Краски и красящие растворы. Для окрашивания микроорганизмов употребляют основные (не кислые) анилиновые краски, которые хорошо адсорбируются микробными клетками.

Анилиновые краски поступают в продажу в виде порошков или кристаллов. Наиболее простой способ приготовления красящих растворов — растворение 1—2 г краски в 100 мл дестиллированной воды. Так готовят водные растворы сафранина (2 г на 100 мл .воды), малахитовой зелени (1 г), метиленовой сини (1,5 г), нейтральрота (1,5), хризоидина (0,7 г). Эти растворы перед употреблением фильтруют. Они не стойки и хранят их в темных флаконах. Они красят нежно, не резко, но медленно и далеко не всех микробов.

Усиление действия красок достигается повышением концентрации красящего раствора до 4 и более процентов, а также добавлением к красящим растворам протравляющих веществ; щелочей, спирта, фенола, анилина, формалина. Спирто-водные растворы красок стойки, долго сохраняются и хорошо красят микробов, поэтому они более употребительны в бактериологической практике, чем водные. Их готовят из насышенных спиртовых растворов красок: растворяют 1 г краски в 10 мл спирта и из этого раствора готовят рабочие спирто-водные растворы.

Растворы красок с фенолом весьма употребительны.

Феноловый (карболовый) генцианвиолет (для окраски по Граму). К 10 мл спиртового насыщенного раствора генцианвиолета добавляют 100 мл 2-проц. водного раствора кристаллического фенола. Раствор фильтруют через бумажный фильтр и разливают по флаконам.

Феноловый фуксин Циля. К 10 мл насыщенного спиртового раствора основного (кристаллического) фуксина добавляют 100 мл 5-проц. водного раствора кристаллического фенола и фильтруют через бумажный фильтр.

Фуксин Пфейфера. Разбавляют 1 ч. фуксина Циля 10 ч. дистиллированной волы.

Щелочная метиленовая синь. К 30 мл насыщенного раствора метиленовой сини добавляют 100 мл 0,1-проц. едкого кали.

Обработка стекол. Препараты готовят на чистых и обезжирен яых предметных стеклах. Капля воды, нанесенная на поверхность хорошо обезжиренного стекла, равномерно расплывается.

Обезжиривание стекол достигается одним из следующих способов:
1) кипячение стекол в едкой смеси (дву хромовокислый калий — 20,0, концентрированная серная кислота — 20,0 и вода — 200,0) и последующее промывание водой;
2) промывание стекол в 10-проц растворе едкого кали, затем ополаскивание водой;
3) выдерживание в спирто-эфировой смеси;
4) проведение стекла 2—3 раза через пламя спиртовой лампочки, протирание фильтровальной бумагой.

Приготовление препарата. Препараты готовят из жидкого материала (серозная жидкость, гной, кровь, бульонная культура) а из плотного материала (с агаровых и желатиновых сред, высохшего трупного материала и пр.). В последнем случае материал предварительно разводят физиологическим раствором, после чего бактериологической петлей делают на середине стекла тонкий мазок. Мазок высушивают при комнатной температуре, фиксируют и красят.

Фиксация необходима для того, чтобы прикрепить микробов к стеклу и убить их для лучшего восприятия окраски и для безопасности в дальнейшей работе.

Фиксация достигается: 2—3-кратным проведением препарата мазком вверх через пламя спиртовой горелки, действием этилового спирта 96° в течение — 8—12 мин., метиловым спиртом — 2—4 мин., смесью равных частей спирта с эфиром (смесь Никифорова) — 3 — 5 мин.