Способ фракционированных посевов на плотных питательных средах
Материал, взятый бактериологической петлей или иглой, распределяют зигзагообразной линией по поверхности плотной среды. По следу линии микробы будут распределяться массами, а затем отдельными клетками, которые дадут изолированные колонии. Вместо бактериологической иглы можно употреблять стеклянные изогнутые палочки-шпадели.
Способ разливок в чашки Петри. Смесь микробов вносят в пробирку с расплавленной плотной средой, где вращением между ладонями равномерно распределяют (первое разбавление); затем из первой пробирки петлей материал переносят во вторую пробирку (второе разбавление); после размешивания из второй пробирки несколько петель переносят в третью пробирку (третье разбавление). Затем содержимое всех пробирок выливают (с соблюдением стерильных условий) в чашки Петри, каждое разбавление в отдельную чашку, нумеруя последние (№ 1, № 2, № 3).
Изучение колоний. Изолированные на плотных средах микроорганизмы после суточного, а иногда и более продолжительного пребывания в термостате при 37° образуют колонии, видимые простым глазом. Каждая колония обычно вырастает из одной бактериальной клетки. Микробы различных видов образуют различные по внешнему виду колонии, чем пользуются для приблизительного определения вида микроба.
Отвивка колоний. Внешние признаки колоний часто позволяют определить ориентировочно вид микроба. При изоляции микробов из материалов павших от инфекционных болезней животных этому способствует еще и то обстоятельство, что микроорганизмы, вызвавшие гибель животного, находятся в крови и внутренних органах в подавляющем количестве, а потому дают на среде обычно массу однородных колоний.
Те колонии, когорые вызывают интерес, обводят кружком на дне чашки восковым карандашом, чернилами или тушью. Такой прием позволяет легко отыскать их при отвивке.
Отвивку колоний производят чаще всего на обычные бактериологические среды. При отвивке из колоний на косой МПА вторично проверяют чистоту культуры, для чего делают вторично фракционированный посев (см. изоляция микробов), стремясь к тому, чтобы в конце проводимой по агару линии были отдельные колонии, которые в случае чистой культуры будут одинаковы. Отвивка в желатину производится уколом.